민주노총 산하 민주연합노조는 미국산 쇠고기 수입 반대 투쟁에 적극적으로 참여했다. 전국 4개 지역의 미국산 쇠고기 야적 냉동창고에서 운송 저지 투쟁을 벌였으며, 서울시청 앞에서 파업문화제를 개최하여 결의를 다졌다. 환경미화원들은 시청 면담을 통해 열악한 노동 현실을 알리고 개선을 요구했다. 민주연합노조는 강동냉장과 고려물류 등 냉동창고에서 미국산 쇠고기 운송 저지 투쟁을 선도적으로 진행했으며, 서울시청 앞 민주노총 텐트 사수 과정에서 용역깡패들과 충돌하여 부상자가 발생하기도 했다.